Окраска по Граму — это базовый микробиологический метод, используемый для классификации бактерий на грамположительные и грамотрицательные. Метод основан на различиях в строении клеточной стенки прокариот, что позволяет проводить их дифференциацию под микроскопом.
Принцип метода
Грамположительные бактерии
Грамположительные бактерии имеют толстую клеточную стенку, состоящую из многослойного пептидогликана. Основные компоненты:
- Пептидогликан
- Тейхоевые кислоты
- Белки, служащие рецепторами
Грамотрицательные бактерии
У грамотрицательных бактерий стенка состоит из тонкого слоя пептидогликана, периплазматического пространства и наружной мембраны. Ключевые элементы:
- Периплазматические ферменты
- Липополисахарид (ЛПС)
Методика окраски
Основные этапы окраски:
- Нанесение основного красителя.
- Применение раствора Люголя.
- Обесцвечивание с помощью спирта.
- Докрашивание дополнительным красителем.
- Промывание и сушка препарата.
Варианты окраски
- Классический метод: Стандартный подход для диагностики.
- Модификация Hucker: Ускоренная версия с минимальным временем обработки.
- Модификация Burke: Не требует фиксации мазка.
- Модификация Синева: Использует фильтровальную бумагу для улучшения результатов.
Устранение ошибок
Проблемы с окраской грамположительных бактерий
Причины и решения:
- Переобесцвечивание: Уменьшите время обработки обесцвечивающим раствором.
- Старая культура: Используйте свежие образцы.
Проблемы с окраской грамотрицательных бактерий
Причины и решения:
- Слишком густой мазок: Используйте меньше материала для мазка.
- Плохое обесцвечивание: Проверьте правильность раствора и повторите процедуру.
