Методы оценки антибиотикочувствительности делятся на два основных вида:
- Фенотипические.
- Генотипические.
При использовании генотипических методов проводится прямая детекция генов, в которых закодированы детерминанты устойчивости к антибиотикам. Это направление хотя и является перспективным, на данный момент не слишком развито. При таком методе используют ДНК-ДНК гибридизацию, амплификацию в ПЦР и другие.
При применении фенотипических методов оценивают такие параметры как скорость роста и биохимическая активность микроорганизмов. Самыми распространенными методами такого типа является метод серийных разведений и диффузионный метод, базирующийся на детекции роста культур.
Получить КП на бактериологические анализаторы
Методы серийных разведений
В методах серийных разведений определяется основной количественный показатель – МПК (минимальная подавляющая концентрация). Он показывает какова антибактериальная активность антибиотика. Для проведения исследований используют чашу Петри или пробирку с питательной средой, в которую вносят антибиотик. После к ней подсевают культуру исследуемой бактерии. Наличие или отсутствие роста оценивается после инкубации. Концентрации антибиотиков подбираются с учетом задач исследований. Длительность инкубационного периода обычно составляет от 18 до 20 часов.
Одним и разновидностей такого метода является метод, при котором используются только две концентрации антибиотиков – пороговая и пограничная. Они позволяют дифференцировать чувствительные микроорганизмы от промежуточных и промежуточные от пограничных.
Для проведения исследований в методе серийных разведений может использоваться бульон или агар-агар в качестве питательной среды. Объем питательной среды указывает на то, какой именно используется метод – макро- или микроразведений. Более распространено использование бульона. На его основе создано большое количество специальных тест-систем.
Классическая технология предполагает визуальную регистрацию мутности или ее отсутствие. В специальном оборудовании используется спектрофотометрическое измерение оптической плотности питательных сред. Также применяются специальные индикаторы, остро реагирующие на изменение уровня pH, которые позволяют сокращать время исследований и определять результаты на начальных стадиях роста.
Диффузионные методы
Существует и используется два основных метода такого типа:
- Диско-диффузионный.
- Эпсилометрический или Е-тест.
Диско-диффузионный метод основан на формировании вокруг диска из бумаги, пропитанного антибиотиком, зоны ингибиции поверхностного роста на плотной питательной среде. В этом случае диск с препаратом кладут сверху плотной питательной среды, которую предварительно засеивают микроорганизмами. Процесс диффузии из диска в среду начинается сразу же. Микроорганизмы при этом начинают адаптироваться к особенностям питательной среды. Рост бактерий начинается на той стороне диска, где к концу лаг-фазы концентрация антибиотика оказывается ниже подавляющей. К концу исследования на поверхности питательной среды появляется сплошной газон из бактерий, а вокруг диска – круглая зона ингибиции.
Рассчитать стоимость бактериологических анализаторов
Для оценки результатов используют пограничные значения диаметра зоны ингибиции. Это позволяет получать зависимости между величиной МПК антибиотика и диаметром зоны ингибиции. Важным моментом при проведении такого исследования является правильный выбор концентрации антибиотика в диске.
Сопоставляя пограничные и экспериментальные значения зоны ингибиции роста определяется уровень чувствительности микроорганизмов. Применять диско-диффузионный метод можно не для всех сочетаний микроб-бактерия. Например, бета-лактамины и стрептококки группы утоапв не могут использоваться совместно для установки четкой зависимости.
В эпсилометрическом методе для проведения исследований используется узкая полоска полимерного материала, которая пропитана разными концентрациями антибиотиков. Ингибиция роста вокруг полоски происходит только в той зоне, где концентрация АБП выше МПК. Вокруг носителя образуется каплевидная зона ингибиции. Для учета величины МПК используются те участки, где граница зоны ингибиции плотно прилегает к носителю.
Для получения быстрых и точных результатов чувствительности микроорганизмов к антибиотикам можно использовать специальное оборудование - анализаторы чувствительности микроорганизмов Юнона® ХК-II и Юнона® Formula. Приборы выдают высокоточные результаты и разработаны с учетом стандартов CLSI. Система анализа в них реализована посредством применения колориметрического и турбидиметрического методов.
